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Título
Regeneração muscular em modelo experimental de recuperação nutricional: análise morfológica e bioquímica
Orientador
Profª Drª Adriana Pertille
Autor
Kizzy Ferreira Moura
Palavra chave
músculo esquelético, desnutrição proteica, lesão, fatores
de regulação miogênica
Grupo CNPQ
Programa
MS - CIÊNCIAS DO MOVIMENTO HUMANO
Área
CIÊNCIAS DA SAÚDE
Data da defesa
03/08/2015
Nº Downloads
819
Resumo
A desnutrição nos primeiros anos de vida, refletida por indicadores
antropométricos do estado nutricional, é um dos maiores problemas de saúde
enfrentado por países em desenvolvimento. O tecido muscular esquelético é
sensível à desnutrição proteica por ser um reservatório de proteína no
organismo. Quando há déficit proteico na dieta, este tecido torna-se alvo de
depleção, ocasionando alterações nas fases de crescimento e diferenciação
das fibras musculares. Nesse sentido, este estudo teve como objetivo analisar
a evolução da regeneração muscular após criolesão no músculo tibial anterior
de ratos jovens desnutridos e recuperados. Foram utilizados 40 ratos da
linhagem Wistar, divididos em 2 grupos: Nutrido (N, n=20 ), receberam dieta
normoproteica (14% de proteína) por 90 dias; e o Desnutrido Recuperado (DR,
n=20), submetidos a duas fases nutricionais, correspondendo a 45 dias de
desnutrição com dieta hipoproteica (6% proteína), seguida por 45 dias de dieta
normoproteica (14% proteína). Ao completar a fase de recuperação, todos os
animais foram submetidos à criolesão no músculo tibial anterior direito e
posteriormente divididos aleatoriamente em 6 subgrupos (n=5), para melhor
avaliação da resposta tecidual: Grupo Nutrido Lesado (NL) 7, 14 e 21 dias; e
Grupo Desnutrido Recuperado Lesado (DRL) 7, 14 e 21 dias. Para análise
morfológica foram utilizados apenas os animais 14 dias (NL, n=5; DRL, n=5) e
para análise bioquímica foram utilizados todos os tempos (NL, n=15; DRL,
n=15). O músculo tibial anterior foi retirado para análise da área de secção
transversa (AST), quantificação de tecido conjuntivo (TC), área de inflamação
/regeneração (microscopia de luz) e verificação do conteúdo das proteínas
MyoD e Miogenina e da citocina TGF-1 (immunoblotting). A avaliação dos
dados foi realizada através do programa Bioestat. Para comparação entre os
grupos nos diferentes tempos foi aplicado o teste de análise de variância
(ANOVA) one way, seguido de Tukey-Kramer. Para outras análises foi utilizado
o teste t Student . Em todos os casos foi adotado um valor de p<0,05 para
significância estatística. O grupo DR apresentou menor massa corporal e
menor consumo alimentar no processo de desnutrição, quando comparado ao
grupo nutrido (p<0,05). A quantidade de tecido conjuntivo e a área de
inflamação 14 dias pós-lesão foi maior no grupo Desnutrido Recuperado
Lesado (DRL) (p<0,05). A AST das fibras regeneradas do grupo DRL foram
menores quando comparadas às fibras normais (controle) do mesmo grupo,
sendo esta redução estatisticamente significante (p<0,05). No grupo Nutrido
Lesado (NL), as fibras regeneradas pós-lesão atingiram 88% do seu controle,
não sendo observada diferença estatística significante. Na comparação entre
os grupos (DRL e NL) nota-se que a AST foi menor no grupo DRL (p<0,05). O
conteúdo das proteínas MyoD e Miogenina foi maior no grupo NL. A citocina
TGF-1 não apresentou diferença entre os grupos. Conclui-se que o protocolo
proposto de desnutrição pós desmame e recuperação nutricional por dois
meses foi eficaz para demonstrar alterações no processo de regeneração do
músculo tibial anterior de ratos jovens. Observou-se atraso no reparo muscular,
com aumento da área de inflamação e porcentagem de tecido conjuntivo,
redução da área de secção transversa das fibras musculares, redução do
conteúdo de MyoD e miogenina. O conteúdo de TGB- 1 não foi alterado com
a restrição alimentar.
Abstract
Malnutrition early in life, as measured by anthropometric indicators of nutritional
status, is one of the biggest health problems faced by developing countries.
Skeletal muscle tissue is sensitive to protein malnutrition because it is a protein
reservoir of the body. When there is a deficit in protein diet, this tissue becomes
depleted target, causing changes in the phases of growth and differentiation of
muscle fibers. Therefore, this study aimed to analyze the evolution of muscle
regeneration after cryoinjury the tibialis anterior muscle of rats undernourished
and recovered youth. 40 Wistar rats were divided into 2 groups were used:
Nourished (N, n = 20) received normal protein diet (14% protein) for 90 days;
Malnourished and Recovered (DR, n = 20), submitted to two nutritional stages,
corresponding to 45 days of malnutrition with hypoproteic diet (6% protein),
followed by 45 days of normal protein diet (14% protein). To complete the
recovery phase, all animals underwent cryoinjury the tibialis anterior muscle
right and randomly divided into 6 subgroups (n = 5), to better assess the tissue
response: Nourished Group injured (NL) 7, 14 and 21 days; Malnourished and
Group Re injured (DRL) 7, 14 and 21 days. For morphological analysis the
animals were used only 14 days (NL, n = 5; DRL, n = 5) and were used for
biochemical analysis all times (NL n = 15; DRL, n = 15). The tibialis anterior
muscle was removed for analysis of cross-sectional area (CSA), quantification
of connective tissue (CT) area of inflammation / regeneration (light microscopy)
and verifying the content of MyoD and Myogenin proteins and TGF-1 cytokine
(immunoblotting). The evaluation of the data was performed using the Bioestat
program. For comparison between groups in different times we applied the
analysis of variance (ANOVA) one way, followed by Tukey-Kramer. For further
analysis we used the Student t test. In all cases it adopted a value of p <0.05 for
statistical significance. The DR group had lower body mass and lower food
consumption in malnutrition process, when compared to the large group
(p<0,05). The amount of connective tissue and inflammation area 14 days postinjury
was greater in the damaged malnourished group Re (DRL) (p<0,05). AST
of the regenerated fibers of the DRL group were lower when compared to
standard fibers (control) the same group, a statistically significant reduction
(p<0,05). Nourished on the injured (NL) group, the post-injury regenerated
fibers reached 88% of its control, not being statistically significant difference.
Comparing the groups (DRL and NL) note that AST was lower in the group DRL
(p(0,05). The content of MyoD and Myogenin protein was higher in the NL
group. The TGF-1 cytokine did not differ between groups. It follows that the
proposed protocol post weaning undernutrition and nutritional recovery for two
months was effective for changes in the regeneration process of the tibialis
anterior muscle in young rats. Delay was observed in muscle repair, with
increased inflammation area and percentage of connective tissue, reduced
cross-sectional area of muscle fibers, reducing the content of MyoD and
myogenin. Content TGB- 1 did not change with dietary restriction.
