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Título
Análise quimiometabólica e biomolecular da musculatura esquelética desnervada de ratos submetidos ao tratamento com o aminoácido leucina
Orientador
Carlos Alberto da Silva
Autor
Carolina Barbosa Ribeiro
Palavra chave
Desnervação. Glicogênio. Leucina.
Grupo CNPQ
Programa
MS - FISIOTERAPIA
Área
CIÊNCIAS DA SAÚDE
Data da defesa
15/12/2010
Nº Downloads
1725
Resumo
A musculatura esquelética exerce um papel importante no controle glicêmico, sendo assim, a homeostasia metabólica das fibras musculares pode ser comprometida por diferentes fatores como desnervação. O objetivo do estudo foi investigar no músculo esquelético de ratos submetidos à desnervação, os eventos ligados ao tratamento com o aminoácido leucina, por meio de análise bioquímica, biomolecular e dos indicadores do status metabólico. Foram utilizados ratos Wistar, divididos: grupo controle (C), desnervado (D), controle tratado com o aminoácido leucina (C+L) e desnervado tratado com aminoácido leucina (D+L), nas dose 5mM; 1,25mM e 0,30mM, durante 7 dias. O glicogênio foi analisado no fígado e nos músculos sóleo, gastrocnêmio branco e gastrocnêmio vermelho, por meio do método fenol sulfúrico. Análise da proteína foi realizada no sóleo, pelo método colorimétrico, por um kit laboratorial. Análise biomolecular, foi através do Western Blot. Foi realizado um estudo de anestésico e também foram avaliados: constante de decaimento da glicemia, comportamento, perfil eletrocardiográfico e estado de saúde. Análise estatística foi pelo teste de normalidade de Shapiro-Wilk, ANOVA: one way e Tukey. Resultados, na análise do glicogênio muscular e do fígado, foi verificado redução no grupo 5 mM (L5); e aumento no 1,25 mM (L1,25) e 0,30 mM (L0,30), comparadas com C, e aumento de L1,25 comparado a L5. Nos músculos sóleo, gastrocnêmio branco e vermelho, ocorreu redução de L5 e L1,25 comparado com C, e em L5 comparado a L1,25. Por outro lado, houve aumento no L0,30, comparado com as demais doses, e somente para sóleo se comparado com o C. No desnervado tem-se diminuição do glicogênio dos músculos gastrocnêmios para o C, e no fígado e nos músculos analisados se comparado com C+L. O desnervado suplementado 0,30mM obteve diminuição para todas as amostras se comparado com os demais grupos, menos no músculo sóleo do grupo D e D+L, não houve diferença estatística. O conteúdo de proteína muscular no sóleo desnervado diminui quando comparado ao C, no animal suplementado (L0,30) e desnervado/suplementado (DL0,30), apresentaram aumento significativo comparado com o D, quanto as demais comparações não foram estatisticamente significantes. O padrão dos sistemas enzimáticos indicadores do “status” metabólico das fibras musculares indicou redução no AMPK do C+L e D+L. Por outro lado no D foi observado elevação na fosforilação.Na enzima AKT houve elevação no D; e se comparado ao C e D observa-se elevação dos grupos C+L e D+L. Para mTOR houve redução no D. Nos grupos C+L e D+L ocorreu elevação se comparados com C e D, respectivamente.Por fim, em ACC houve elevação no D e redução dos grupos tratados. Sendo assim, altas doses de leucina podem comprometer a homeostasia do funcionamento bioquímico do organismo e possivelmente levar na prática clinica, á algumas possíveis complicações. O contrário, baixas doses podem auxiliar num melhor funcionamento do sistema insulínico, exercendo um papel anti-catabólico.
Abstract
The skeletal muscle plays an important role in glucose control, so the metabolic homeostasis of muscle fibers can be compromised by various factors such as denervation. The aim was to investigate the skeletal muscle of rats subjected to denervation, the events related to treatment with the amino acid leucine, through biochemical, biomolecular and indicators of metabolic status. Wistar rats were divided: the control group (C), denervated (D), control treated with the amino acid leucine (CL) and denervated treated with amino acid leucine (DL) in 5mM, 1.25 mM and 0.30 mM for 7 days. Glycogen was analyzed in liver and soleus, white gastrocnemius and red, using the phenol sulfuric method. Protein analysis was performed in the soleus, the colorimetric method by a laboratory kit. Biomolecular Analysis was by Western Blot. We conducted a study of anesthetic and were also evaluated: glucose decay constant, behavior, electrocardiographic profile, and health status. Statistical analysis was by the normality test of Shapiro-Wilk test, ANOVA: one way and Tukey. Results, analysis of liver glycogen was observed reduction of 5 mM (L5) and increased at 1.25 mM (L1, 25) and 0.30 mM (L0, 30), compared with C, and increased L1, 25 as compared to L5. In the soleus, gastrocnemius white and red, reduction of L5 and L1,25 compared with C, compared to L5 and L1, 25. Moreover, there was an increase in L0, 30, compared to other doses and only for soleus compared with C. In denervated has decreased the glycogen of the gastrocnemius muscles to C, and liver and muscles examined compared with C L. The denervated supplemented with 0.30 mM had decreased for all samples when compared with other groups, less in the soleus muscle of group D and DL, which was not statistically different. The protein content in soleus muscle denervated had decreased compared to C, in animals supplemented (L0,30), and denervated / supplemented (DL0, 30), increased significantly compared with the D, as the other comparisons were not statistically significant. The pattern of enzyme systems indicators of the status of metabolic muscle fibers showed a reduction in AMPK CL and DL. Moreover the increase in D was observed fosforilação.Na AKT enzyme was elevated in D, and compared to C and D there is elevation of groups CL and L. D For mTOR decreased in D. In CL and DL groups had elevated compared with C and D, respectivamente.Por end, there was an increase in ACC and reduction of the D groups. Thus, high doses of leucine may compromise the homeostasis of the biochemical functioning of the body and possibly lead in clinical practice, some possible complications. The contrary, low doses may help in better functioning of insulin, playing a anti-catabolic.
