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Título
Efeito da estimulação diafragmática elétrica transcutânea (EDET) na fibrose pulmonar provocada por bleomicina em ratos. Análises histopatológicas e imunohistoquímica.
Orientador
Prof. Dra. Maria Luiza Ozores Polacow
Autor
Laisa Antonela dos Santos
Palavra chave
Bleomicina, fibrose pulmonar, estimulação elétrica, fisioterapia.
Grupo CNPQ
Programa
MS - FISIOTERAPIA
Área
CIÊNCIAS DA SAÚDE
Data da defesa
01/02/2013
Nº Downloads
1305
Resumo
A bleomicina é um antibiótico antineoplásico, que promove toxicidade pulmonar, utilizado experimentalmente para avaliar os mecanismos gerais de fibrose. A estimulação diafragmática elétrica transcutânea (EDET) é um recurso que favorece o fortalecimento e incremento metabólico da musculatura estimulada. O objetivo deste foi analisar o efeito da EDET no parênquima pulmonar com fibrose provocada experimentalmente pela bleomicina e seus efeitos sobre a massa corporal e de diversos órgãos. Utilizou-se 38 ratos Wistar, divididos em 6 grupos: grupo controle (C); grupo apenas estimulado (EDET) – com treinamento diário de 20 minutos durante 7 dias; dois grupos administrado bleomicina - 2,5 mg/Kg via intratraqueal, em dose única – sendo um grupo eutanásiado após 7 dias (B 7) e outro grupo após 14 dias (B 14), e dois grupos administrado bleomicina e tratado com EDET: num a estimulação foi realizada após 24 horas da instilação de bleomicina (B+EDET 7) e no outro grupo foi realizada 7 dias após a instilação (B+EDET 14). Os animais foram pesados, bem como suas vísceras; fragmentos de pulmão foram processados histologicamente para coloração em Hematoxilina e Eosina, Picrosírius e 8-Isoprostano (8-iso-PGF-2). Foi determinada a densidade de área alveolar, por planimetria por contagem de pontos. As áreas birrefringentes foram analisadas em microscopia de polarização e o perfil numérico das células presentes nos septos interalveolares. O estresse oxidativo foi analisado pelas Substâncias Reativas ao Ácido Tiobarbitúrico (TBARS) e os radicais livres marcados pelo 8-iso-PGF-2. Para análise dos dados utilizou-se teste Shapiro-Wilk, seguido de ANOVA one-way, com post hoc Bonferroni, e Kruskal-Wallis, com post hoc Dunn, considerando p < 0,05. O peso corporal dos animais tratados com bleomicina, no grupo 7 dias e 14 dias, sofreu redução significativa, sendo esta redução significativamente maior com a estimulação. Tanto o timo quanto a gordura periepididimal sofreram redução significativa no grupo B+EDET 7 e no B+EDET 14 dias, o peso das adrenais foi significativamente maior no grupo B+EDET 14. A bleomicina provocou redução significativa na densidade de área da parte aérea, tanto para 7 dias quanto 14 dias e o tratamento agudo do grupo 7 dias com a EDET evitou esta redução, resultado não encontrado no tratamento subagudo (p < 0,01). Houve aumento no número de leucócitos e macrófagos no grupo B 7 (p < 0,05). Em relação à análise do TBARS, ambos os grupos B 7 e B+EDET 7, mostraram aumento na porcentagem de oxidação tecidual, já a reação ao 8-iso-PGF-2 houve aumento da peroxidação lipídica no grupo B 7 e redução no grupo B+EDET 7. O número de leucócitos e macrófagos manteve-se elevado no grupo B 14, sendo no grupo B+EDET 14 o número de macrófagos foi significativamente menor. A porcentagem de TBARS, bem como a birrefringência, apresentaram aumento significativo no grupo B14 e mantiveram-se elevados nos grupos B+EDET 14. A bleomicina promoveu alterações, gerando um quadro inflamatório aos 7 dias e fibrose pulmonar aos 14 dias. A estimulação elétrica reduziu o quadro inflamatório do parênquima pulmonar na fase aguda, no entanto na fase subaguda não foram encontradas tais alterações, com a fibrose pulmonar já instalada, evidenciando a importância do tratamento precoce na reação inflamatória.
Abstract
Bleomycin is an anti-cancer antibiotic that is toxic to the lungs and has been used in experiments to evaluate the mechanisms of pulmonary fibrosis. Transcutaneous electrical diaphragmatic stimulation (TEDS) is employed to strengthen the stimulated muscles and enhance their metabolism. The aim of the present study was to analyze the effect of TEDS on the lung parenchyma with fibrosis experimentally induced by bleomycin and its effect on body mass and the mass of different organs. Thirty-eight Wistar rats were distributed among six groups: control group; TEDS-stimulated group with daily 20-minute training sessions for seven days; two groups submitted to a single intra-tracheal dose of bleomycin (2.5 mg/Kg) (one group euthanized after 7 days (B 7) and one euthanized after 14 days (B 14); and two groups submitted to bleomycin and TEDS (stimulation administered 24 hours after the administration of bleomycin in one group (B+TEDS 7) and 7 days after the administration of bleomycin in the other group (B+TEDS 14). Body mass and the mass of the entrails were determined. Lung fragments were submitted to histological analysis with hematoxylin-eosin, picrosirius and 8-isoprostane (8-iso-PGF-2). Density of the alveolar area was determined by planimetrics (count of points). Areas of birefringence were analyzed using polarization microscopy and cell counts in inter-alveolar septa. Oxidative stress was analyzed based on thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and free radicals labeled by 8-iso-PGF-2. Statistical analysis involved the Shapiro-Wilk test, followed by one-way ANOVA with the Bonferroni post hoc test, and the Kruskal-Wallis test with Dunn’s post hoc test. Significance was set to 5% (p < 0.05). Body weight was significantly reduced in the animals submitted to bleomycin at both seven and 14 days. Weight reduction was significantly greater among the animals submitted to TEDS. Both thymus and peri-epididymal fat were significantly reduced in the B+TEDS 7 and B+TEDS 14 groups. Adrenal gland weight was significantly greater in the B+TEDS 14 group. Bleomycin caused a significant reduction density of the alveolar area at both seven and 14 days. This reduction did not occur in the B+TEDS 7 group (acute stimulation), but did occur in the B+TEDS 14 group (sub-acute stimulation) (p < 0.01). A significant increase in leukocytes and macrophages was found the B 7 group (p < 0.05). In the TBARS analysis, both the B 7 and B+TEDS 7 groups exhibited an increase in the percentage of tissue oxidation. The 8-iso-PGF-2 analysis revealed an increase in lipid peroxidation in the B 7 group and a reduction in the B+TEDS 7 group. The number of leukocytes and macrophages remained high in the B 14 group, whereas the number of macrophages was significantly lower in the B+TEDS 14 group. The percentages of TBARS and birefringence were significantly higher in the B 14 and B+TEDS 14 groups. In conclusion, bleomycin caused an inflammatory process at seven days and pulmonary fibrosis at 14 days. Electrical stimulation led to a reduction in the inflammation of the lung parenchyma in the acute phase, but no changes were found in the sub-acute phase, when pulmonary fibrosis had already been installed. These findings underscore the importance of early treatment to control the inflammatory reaction.
