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Título
Efeito do ácido alfa-lipóico e ácido hialurônico-carboximetilcelulose sobre a regeneração nervosa e recuperação funcional em ratos após neurotmese
Orientador
PROFA. DRA.ROSANA MACHER TEODORI
Autor
FERNANDO ALIPIO ROLLO NETO
Palavra chave
plasticidade neuronal, ácido lipóico, ácido hialurônico, regeneração nervosa periférica, autoenxerto de nervo, recuperação funcional.
Grupo CNPQ
Programa
MS - CIÊNCIAS DO MOVIMENTO HUMANO
Área
CIÊNCIAS DA SAÚDE
Data da defesa
19/02/2018
Nº Downloads
593
Resumo
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da associação entre ácido hialurônico carboximetilcelulose (HA-CMC) e ácido alfa lipóico (AL), bem como da associação de ambos, sobre a regeneração nervosa e recuperação funcional após autoenxerto de nervo em ratos. Trinta ratos Wistar (179.88 ± 23,92 g) foram divididos em 5 grupos (n=6), Controle (C), Lesão (L), Lesão + Ácido Lipóico (LL), Lesão + Ácido Hialurônico (LH), Lesão + Ácido Lipóico + Ácido Hialurônico (LLH). Após anestesia (cloridrato de cetamina – 1,16 g/10mL e cloridrato de xilazina – 2 g/100 mL, proporção 3:2, dose = 0,09 mL/100g e 0,06 mL/100g massa corporal, respectivamente), o nervo isquiático esquerdo foi seccionado nos grupos L, LL, LH e LLH, sendo retirado um segmento de 8 mm, que foi invertido a 180º e reconectado por 2 pontos de sutura epineural em cada extremidade. Aos grupos LH e LLH, foi administrado 0,2 mL de uma solução de HA-CMC ao redor do nervo submetido a autoenxerto de nervo. Aos animais dos grupos LL e LLH foi administrada uma solução de ácido α-Lipóico, por via orogástrica, em concentração de 100 mg/kg, após 24 horas da lesão (7 x/semana, 8 semanas). Realizou-se o registro da marcha (pré-operatório, 7º, 14º, 21º, 28º, 35º, 42º, 49º, 56º dias de pós-operatório (PO). O nervo isquiático de todos os animais foi processado para análise morfométrica e quantitativa (INSTAT, version 3). Para a analise morfométrica e funcional foram utilizados os testes ANOVA One - Way seguido do teste de Tukey HSD. Considerou-se p≤0,05. A massa do músculo sóleo em todos os grupos lesados foi menor que no controle (p<0,05). Em todos os grupos lesados o IFC estava próximo de -100 a partir do 7º PO em relação ao pré-operatório (p<0,05), não tendo sido recuperados os valores de normalidade até o 56º dia PO. Todos os grupos lesados apresentaram densidade de área de tecido conjuntivo maior comparado ao grupo controle (p<0,05), não havendo diferença significativa entre os diferentes tratamentos (p>0,05). O número de axônios foi maior nos grupos LH e LLH em relação ao controle (p<0,05). O diâmetro dos axônios, diâmetro das fibras nervosas e espessura das bainhas de mielina foram menores nos grupos lesados em comparação aos achados no grupo controle (p<0,05), não havendo diferença entre os grupos submetidos à lesão (p>0,05). A razão G estava dentro dos valores de normalidade em todos os grupos. Conclui-se que a administração de HA-CMC ou de AL após autoenxerto de nervo em ratos, assim como a associação de ambos tratamentos, não favoreceu a regeneração nervosa e recuperação funcional, sendo este processo extremamente complexo em lesões nervosas graves que exigem autoenxertos.
Abstract
The aim of this study was to evaluate the effect of the association between hyaluronic acid carboxymethyl cellulose (HA-CMC) and alpha lipoic acid (LA), as well as the association of both, on the nerve regeneration and functional recovery after nerve autograft in rats. Thirty Wistar rats (179.88 ± 23,92 g) were divided into 5 groups (n=6), Control (C), Lesion (L), Lesion + LA (LL), Lesion + HA-CMC (LH) Lesion + LA + HA-CMC (LLH). After anesthesia (ketamine hydrochloride-1.16 g/10ml and xylazine hydrochloride-2 g/100mL, proportion 3:2, dose ratio = 0.09 mL/100g weight and 0.06 mL/100g body weight, respectively), the left sciatic nerve was sectioned in the animals of the groups L, LL, LH and LLH, being withdrawn a 8 mm segment, which was reversed 180° and reconnected by two epineural suture at each end. It was administered 0.2 mL of a HA-CMC solution around the nerve in the animals of the groups LH and LLH. After 24 hours of the injury a solution of LA (100 mg/kg) was administered (7 times/week, 8 weeks) to the animals of groups LL and LLH. The sciatic functional index (SFI) was registered on pre operatory day and on 7, 14, 21, 28, 35, 42, 49, 56 postoperative (PO) days. The sciatic nerve of all animals has been processed for morphometric and quantitative analysis. For morphometric and functional analysis it was used the ANOVA One-Way test followed by the Tukey HSD. It was considered p≤0.05. The mass of the soleus muscle in all injured groups was less than in the control (p<0.05). In all injured groups the SFI was around-100 from 7 PO compared to the pre-operative day (p<0.05) and the normal values were not recovered until the 56th PO day. All injured groups showed connective tissue area density increased compared to the control group (p<0.05). Among the different treatments there were no significant differences (p>0.05). The number of axons was greater in groups LH and LLH compared to the control group (p<0.05). The diameter of the axons, the diameter of the nerve fibers and the myelin sheath thickness were smaller than control in all injured groups (p<0.05), and there were no difference between the groups (p>0.05). The G ratio was within normal values in all groups. We concluded that the intraoperative administration of HA-CMC or oral administration of LA after nerve autograft in rats, as well as the association of both treatments, not favored the nerve regeneration and functional recovery, being this process extremely complex in severe nerve damage requiring autografts.
